A família Psittacidae vem apresentando o maior número de espécies ameaçadas entre todas as famílias de aves. Os psitaciformes são em sua maioria monogâmicos e são poucas as espécies de psitacídeos neotropicais que contém dimorfismo sexual evidente. No dimorfismo sexual, machos e fêmeas de uma mesma espécie diferem em caracteres sexuais secundários, como tamanho ou coloração. Entretanto estima-se que pelo menos metade das aves no mundo não possua dimorfismo sexual, sendo geralmente sutil e podendo ocorrer somente a partir do período de maturidade sexual. Quando o dimorfismo sexual é pouco evidente, a identificação sexual das aves pode ser realizada pelas técnicas de: cariotipagem, método PCR (Reação em Cadeia da Polimerase), laparoscopia, análise de esteroides fecais, tomografia, radiografia, biometria e ressonância magnética. Outra técnica é a de Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay (LAMP), que será empregada na presente pesquisa para realização de sexagem em aves da família Psittacidae, técnica esta ainda pouco explorada na literatura no que se refere à utilização para a detecção do sexo de aves.

Objetivo Geral (ou primário)

            O objetivo geral desta proposta é fornecer subsídios para programas de criação e conservação de aves no Brasil através da aplicação da técnica de Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay (LAMP) para a sexagem de psitacídeos.

 Objetivos Específicos (ou secundários)

- Submeter esta proposta ao Comitê de Ética no Uso de Animais da PUC Goiás.

- Coletar material biológico de diferentes espécies da família Psittacidae procedentes de lojas autorizadas na venda desses animais, na cidade de Goiânia. 

- Identificar o sexo de exemplares de diferentes espécies da família Psittacidae através da técnica LAMP.

- Propor um método rápido, de baixo custo e com alta especificidade para a sexagem de psitacídeos.

- Promover uma divulgação dos resultados alcançados com caráter de conscientização do processo de extinção de psitacídeos.

- Incentivar a participação de alunos de Iniciação Científica no projeto.

Os psitacídeos brasileiros apresentam bico alto e recurvado, grande variação de tamanho e são conhecidos por sua capacidade em aprender “truques”, fazer o uso de instrumentos e conseguir solucionar problemas, principalmente quando em cativeiro (QUEIROZ FILHO, 2008). O período do ano em que se iniciam as atividades reprodutivas varia segundo a espécie e a idade em que a mesma começa a reproduzir (QUEIROZ FILHO, 2008). Os psitaciformes são em sua maioria monogâmicos e são poucas as espécies de psitacídeos neotropicais que contém dimorfismo sexual evidente (FRANCISCO, 2012).

             No dimorfismo sexual, machos e fêmeas de uma mesma espécie diferem em caracteres sexuais secundários, como tamanho ou coloração (VIEIRA, 2009). Na maioria dos casos, quando o dimorfismo está presente em uma determinada espécie de ave, é o macho que se mostra mais exuberante em suas cores e formatos das penas, pois utiliza essas características como atrativo para as fêmeas no período reprodutivo (PEIXOTO et al., 2008). Entretanto estima-se que pelo menos metade das aves no mundo não possua dimorfismo sexual, sendo geralmente sutil e podendo ocorrer somente a partir do período de maturidade sexual (VIEIRA et al., 2009). 

            Surge então a necessidade de determinação do sexo de aves monomórficas para que garantam o sucesso reprodutivo e produtivo (VIEIRA, 2009). Assim, destaca-se como vantagens da sexagem de aves: ter o conhecimento da razão entre machos/fêmeas, pois em aves monogâmicas isso pode afetar drasticamente o tamanho da próxima geração; proporcionar uma procriação mais segura e pautada no sucesso do ciclo reprodutivo; subsidiar programas de recuperação, manutenção e reprodução em cativeiro e de soltura ou reintrodução de casais potencialmente reprodutores no ambiente natural (PEIXOTO et al., 2008; LEHMKUHL, 2010; GONÇALVES, 2013).

            A identificação sexual das aves pode ser realizada pelas técnicas de: cariotipagem, método PCR (Reação em Cadeia da Polimerase), laparoscopia, análise de esteroides fecais, tomografia, radiografia, biometria e ressonância magnética. 

            Baseando-se no fato de o Brasil reunir uma das maiores riquezas de avifauna do mundo e ser o primeiro com maior número de espécies em extinção e, levando em consideração o princípio de determinação do sexo das aves de uma mesma espécie a fim de evitar o desaparecimento daquelas que se encontram ameaçadas, a presente pesquisa justifica-se por aplicar a técnica de Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay (LAMP) para realização de sexagem em aves da família Psittacidae (VIEIRA, 2009). 

            A LAMP é uma técnica isotérmica que permite amplificar sequências de DNA com grande especificidade, utilizando quatro iniciadores desenhados a partir de segmentos específicos da sequencia que se deseja amplificar (CHIARI, 2010). É denominada de isotérmica porque devido a capacidade de deslocamento da enzima DNA polimerase, dispensa as variações de temperaturas exigidas na PCR para abertura das fitas, anelamento dos iniciadores e extensão da fita (TEIXEIRA, 2016). 

            A detecção do produto de amplificação pode ser determinada pela emissão de fluorescência usando corantes intercalantes, como SYBR green, que é facilmente visível a olho nu e que por isso anula necessidade de utilização de equipamentos caros (NJIRU et al., 2008). Para que o corante intercalante seja “ativado” usa-se a calceína carregada com manganês, o qual começa a emitir fluorescência após a complexação do manganês pelo pirofosfato (subproduto da amplificação) durante a síntese de DNA in vitro, ou seja, a detecção visual dos amplicons LAMP somente ocorrerá se os iniciadores hibridarem com o DNA complementar (TOMITA et al., 2008).