Introdução: As leishmanioses são doenças provocadas por protozoários do gênero Leishmania e transmitidas aos vertebrados por flebotomíneos. As primeiras células recrutadas para o sítio da infecção são neutrófilos. Neutrófilos são eficazes no controle direto de L. (V) braziliensis utilizando mecanismos microbicidas como as armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs), porém ainda não se sabe se esse controle é dependente de espécies reativas de oxigênio (ROS). Objetivos: Investigar o papel do ROS produzido por neutrófilos na infecção por Leishmania (Viannia) braziliensis. Metodologia: Neutrófilos peritoneais de camundongos C57BL/6 WT e PhoxKO serão infectados in vitro com L. (V) braziliensis e L. (L) major para avaliar atividade leishmanicida. A produção de ROS será avaliada pela quantificação do peróxido de hidrogênio por citometria e o NO será dosado no sobrenadante da cocultura de macrófagos-neutrófilos. Será avaliada a interferência de neutrófilos produtores ou não produtores de ROS na infecção de macrófagos por L. (V) braziliensis e L. (L) major. A influência da depleção de neutrófilos na infecção murina in vivo por L. (V) braziliensis e L. (L) major será avaliada por acompanhamento do tamanho da lesão durante 8 semanas. A carga parasitária na infecção murina in vivo de camundongos será avaliada por diluição limitante e o desenvolvimento da lesão será acompanhada semanalmente com a utilização de um paquímetro. Resultados Esperados: Espera-se que a atividade leishmanicida de neutrófilos seja dependende de ROS para a morte de L. (V) braziliensis, e que o ROS favoreça a ativação de macrófagos em cocultura com neutrófilos.

1. Objetivo Geral:

Comparar o papel do ROS produzido por neutrófilos na infecção por Leishmania (Viannia) braziliensis ou Leishmania (Leishmania.) major.

1. Objetivos específicos:

• Avaliar atividade leishmanicida de neutrófilos de camundongos WT e PhoxKO frente a infecção por L. (V) braziliensis e L. (L.) major.
• Avaliar a produção de ROS de neutrófilos WT e PhoxKO infectados por L. (V) braziliensis e L. (L) major.
• Avaliar a interferência dos neutrófilos de camundongos WT e PhoxKO na infecção de macrófagos por L. (V) braziliensis e L. (L) major. 
• Avaliar desenvolvimento de lesão em camundongos C57BL/6 WT e PhoxKO infectados por L. (V) braziliensis e L. (L) major depletados ou não de neutrófilos.
• Avaliar a produção de citocinas pró e anti inflamatórias por células de camundonfos WT e PhoxKO infectados por L. (V) braziliensis e L. (L) major.

• Avaliar alterações histopatológicas em órgãos de camundongos C57BL/6 WT e PhoxKO infectados por L. (V) braziliensis e L. (L) major depletados ou não de neutrófilos.

Há uma grande necessidade de compreender melhor as respostas do hospedeiro frente a infecção por essa doença para avanços no desenvolvimento de novas terapias e estratégias de controle da leishmaniose. Atualmente estudos já demonstraram que as NETs são um mecanismo efetor importante de neutrófilos murinos contra formas amastigotas de L. (V) braziliensis e a adição de enzimas DNAses in vitro aumenta a carga parasitária, prejudicando a formação das NETs. A desgranulação neutrofílica também está envolvida na morte do parasito e sabe-se que há uma produção de ROS por neutrófilos desafiados com L. (V) braziliensis (CARLSEN et al., 2015). Porém, o papel do ROS produzido pelos neutrófilos no controle de L. (V) braziliensis permanece ainda não esclarecido. O objetivo deste estudo é identificar se o ROS do neutrófilo desempenha um papel crucial na eliminação de L. (V) braziliensis e se a ausência do ROS nos neutrófilos interfere no desenvolvimento da infecção.